細胞實驗室的區(qū)域設計
細胞實驗室常規(guī)區(qū)域設計主要有 無菌操作去、孵育區(qū)、制備區(qū)、儲藏區(qū)、清洗、消毒滅菌區(qū)等,各個區(qū)域功能不同 ,分布不同,具體還要以整體房間布局合理安排。
1、無菌操作區(qū)
無菌操作區(qū)是只限于細胞培養(yǎng)及其他無菌操作的區(qū)域,能與外界隔離,不能穿行或受其他干擾。在一般環(huán)境的空氣中,由于存在許多塵埃和雜菌,較易造成污染。因此接種工作要在空氣經過滅菌的環(huán)境里進行,小規(guī)模的無菌環(huán)境可利用超凈工作臺創(chuàng)造,大規(guī)模的需建無菌室。理想的無菌操作室應劃為三部分。
a.更衣室-供更換衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
b.緩沖間-位于更衣間與操作間之間,用于準備工作,還有防止污染的作用,以保證操作間的無菌環(huán)境,同時可放置恒溫培養(yǎng)箱以及小型儀器。
c.無菌操作間-無菌操作間則專用于無菌操作、細胞培養(yǎng),其大小要適當,且其頂部不宜過高以保證紫外線的滅菌效果;墻壁光滑無死角以便清洗和消毒,無菌操作間容積小且為密閉式,一般無菌操作間的空氣消毒用紫外線燈,有的實驗室使用無臭氧紫外線消毒器或電子消毒滅菌器
2、孵育區(qū)
孵育區(qū)也稱培養(yǎng)區(qū),本區(qū)對無菌的要求雖不比無菌區(qū)嚴格,但仍需清潔無塵,因此也應設置在干擾少而非來往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進行,后者費用高,一般實驗室多采用孵箱進行工作。
3、制備區(qū)
制備區(qū)主要進行培養(yǎng)液及有關培養(yǎng)用的液體等的制備。應設有試劑柜、器械柜、實驗臺和上水道、電源等,配備的主要儀器設備有水純化裝置、天平、微波爐、pH計、抽氣泵、電爐、培養(yǎng)分裝器、各種規(guī)格的培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、燒杯、量筒、容量瓶等。在有天平、pH計、磁力拌器等設備下完成制備以后,應在無菌操作臺進行過濾除菌。液體制備直接關系組織細胞養(yǎng)的成敗,因此嚴格無菌操作。
4、儲藏區(qū)
儲藏區(qū)主要存放各類冰箱、干燥箱、液氮罐、無菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等,此環(huán)境也需要清潔無塵。為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般為液氮溫度-196℃。
細胞的凍存過程需要一系列程序降溫,一般為4 ℃下存放30min。轉放-20 ℃ 1 h,再轉入-80—-70℃過夜,之后才可以轉移到液氮內(-196℃)。因此儲存區(qū)配備冰箱、低溫冰箱、超低溫冰箱和液氮罐等設備。
5、清洗和消毒滅菌區(qū)
清潔和消毒滅菌區(qū)應與其他區(qū)域分開,主要進行所有細胞培養(yǎng)器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作,應備有高壓蒸汽滅菌鍋、細菌過濾設備、電熱干燥箱、消毒柜、排風設備等。
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